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临床pcr测定的重复性不好的原因有没有实验室被扩增子污染
其一,是扩增产物的遗留污染,在大规模核酸筛查的过程中,由于样本量大、采取的又是“停人不停机”的连续工作方式,每轮扩增检测之间的清洁可能不到位,同时也无法保证每个扩增管完全密闭,带来“假阳性”的可能。
主要是在采(取)样的过程中,由于取样工具之间的交叉造成污染;或者在核酸提取的过程中,由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。
除实验室污染外,“假阳性”的出现也可能是因不规范操作所致。
反应后NTC中应当没有合成任何产物;若有产物被合成了,则意味着RT-PCR试剂中的一种或多种被扩增产物污染了。未使用“– RT”对照 在RNA制备过程中,事实上不可能完全去除基因组DNA。
试剂污染:PCR试剂、引物和探针可能含有外源性DNA,如不进行严格控制可能导致结果失真。实验环境:实验室空气中可能悬浮着DNA,若不进行空气净化,可能会引入污染。
pcr实验室大面积污染解决办法
1、在实践中,对于污染有DNA的器材,通常丢弃。对于有些需要多次使用的器材,比如在DNA检测中96孔板上的盖板,通常用1%的盐酸浸泡,再用纯水洗净。
2、E. 可用1mol/L 的盐酸对可疑器具或者实验台面进行浸泡或擦拭。盐酸可使DNA脱嘌呤,破坏DNA的结构。F. 若有条件,选择一个新的实验环境进行检测实验最好。
3、对PCR的环境污染,有如下几种治理方法:用常规消毒液定期在环境中喷雾消毒处理。 稀酸处理法:对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤;此方法缺点是盐酸对皮肤有一定的腐蚀性。
4、(2)改进燃煤技术,提高燃烧效率,低硫优质煤优先供给民用,积极开发采用无污染、少污染的能源,改革燃料构成逐步实现燃气化和电气化,扩大联片或集中供热。
5、我老师最近给我们推荐用LemnisCare 的PCR Cleaner,别说不需要之类的,毕竟还是实验重要啊。
消除pcr实验室台面dna污染的化学方法为
E. 可用1mol/L 的盐酸对可疑器具或者实验台面进行浸泡或擦拭。盐酸可使DNA脱嘌呤,破坏DNA的结构。F. 若有条件,选择一个新的实验环境进行检测实验最好。
紫外照射法:紫外波长一般选择254—300nm,照射30分钟至2小时。但需要注意的是,UV照射仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大。 选用商品化的DNA污染祛除剂。推荐Minerva公司的PCR CleanTM 喷雾剂、湿巾。
一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。
加溶液2后不要剧烈摇晃,溶液2处理时间不能太久,一般颠倒6-8次即加溶液3中和,这都是为了避免碱裂解基因组;加溶液3后要混合充分,离心后取上清小心不要吸到白色沉淀,那里有组蛋白包着的基因组DNA。
降低单位空间中的污染物;实验中严格控制层流;实验中使用帽子和口罩。
pcr试验时八连管忘了及时丢,会不会引起污染
1、一般不会,因为容器盖子打开了,但PCR管如果是密封好的就不会造成PCR结果被污染的后果。
2、不能。根据查询中国制药网显示,光学平盖适用于荧光定量PCR,圆盖适用于普通PCR,荧光定量八连管的盖子是一次性的,为保持卫生问题,不能清洗或部分重复利用。
3、整个 PCR 实验的操作都需要特别注意避免污染,来自样本的、试剂的以及实验室各种气溶胶,要始终保持「无核酸观念」。
4、Pcr体系忘记调了会实验有误差。因为忘记离心之后,会导致粘在管壁上的液体无法被酶检测,从而产生误差。
5、除实验室污染外,“假阳性”的出现也可能是因不规范操作所致。个别实验室包括技术人员没有严格按照规定的工作程序进行操作,这是引发“假阳性”的另一种可能。
6、实名制移动手机卡很久没用了也不会自动注销的。所以,实名制手机卡不用后不会自动注销,而是需要主动注销。
PCR实验过程中易发生污染的原因有哪些?
1、PCR实验室中以下情况容易造成污染:实验操作不当:例如不戴手套、不使用洁净的工具和试剂、不洗手等,这些操作会导致细菌和DNA等污染物进入实验体系。
2、PCR反应前污染,主要是样品DNA的交叉污染。提取DNA使用的仪器上残留的杂质DNA或反应管中残留的PCR产物、PCR操作者皮肤或头发等均可引起样品污染。其中PCR产物的污染,也称残留污染(carryover),是引起样品交叉污染的主要因素。
3、试剂污染:PCR试剂、引物和探针可能含有外源性DNA,如不进行严格控制可能导致结果失真。实验环境:实验室空气中可能悬浮着DNA,若不进行空气净化,可能会引入污染。
4、反应后NTC中应当没有合成任何产物;若有产物被合成了,则意味着RT-PCR试剂中的一种或多种被扩增产物污染了。未使用“– RT”对照 在RNA制备过程中,事实上不可能完全去除基因组DNA。
5、画个XX贴纸条吓吓他们呗。害,做分子试验好多年了,这是个倒霉差事。经常有实习生来,搞得很危险。我觉得只要不打扫就行了吧,灰蒙蒙的一层,没人碰就安全了。随时备着些碱液,及时擦洗溴化乙锭。多屯些口罩,手套。
PCR实验室污染如何预防?
加溶液2后不要剧烈摇晃,溶液2处理时间不能太久,一般颠倒6-8次即加溶液3中和,这都是为了避免碱裂解基因组;加溶液3后要混合充分,离心后取上清小心不要吸到白色沉淀,那里有组蛋白包着的基因组DNA。
降低单位空间中的污染物;实验中严格控制层流;实验中使用帽子和口罩。
我觉得只要不打扫就行了吧,灰蒙蒙的一层,没人碰就安全了。随时备着些碱液,及时擦洗溴化乙锭。多屯些口罩,手套。
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